Нтс м9 ван: характеристики, обзор, отзывы, цены и где купить

Содержание

Htc One M9 — Мобильные телефоны / смартфоны

Htc one m 9 32gb


Телефоны и аксессуары » Мобильные телефоны / смартфоны


Киев, Деснянский


18 авг.

HTC one m9 HTC one m8


Телефоны и аксессуары » Мобильные телефоны / смартфоны


Киверцы


16 авг.

2 000 грн.

Договорная


Харьков, Киевский


7 авг.

1 800 грн.

Договорная


Возрождения


27 июль

HTC One M9 Silver


Телефоны и аксессуары » Мобильные телефоны / смартфоны


Киев, Голосеевский


23 июль

HTC One M9 32 Gb


Телефоны и аксессуары » Мобильные телефоны / смартфоны


Николаев, Ингульский


22 июль

Похожие запросы:
  • htc one m9 в рубрике Телефоны и аксессуары
  • htc one m9 в рубрике Электроника
  • htc one m9 в рубрике Запчасти для телефонов

aBi+OMZ/rDETrvY2SlLVLnI4aqzvsBi7HBb2Web4U9/OfDlPUXwX/Sd7HdYhXCXj6It1n7sdQ7FwcPA8TkgckF0wE9RFJ0t8pSgWC11gdqU81KmgPhF6o58xXrduVg0xTICx5WsAjRfCJmV/k91AnB1zh9mgglkbk8E9zfTLfh44MR7dmt3B5bWjvpo7Je0n1kC2CoUUZ3hjI4JzsEuterlo0fqp3gvshwKgjkHUTpS858bVvxkebbmszBpIRVAlyHnpNwN9/EUNNGh3ZVi0RQ==

  • Недавно просмотренные

  • Избранные объявления (0)

  • Избранные результаты поиска

HTC One M9 — обзор, отзывы о НТС Ван М9

8

Рейтинг: 4.06 (4 голосов)

Нет никаких сомнений в том, что в прошлом году HTC One M8 ярко заявил о себе в привлекательном дизайне. С его великолепным цельнометаллическим корпусом, он резко выделяется на фоне пластиковых конкурентов, как и практически каждый флагманский смартфон, который был заявлен в этом году, включая Samsung Galaxy S6 и Galaxy S6 Edge.

По иронии судьбы, теперь HTC One M9 кажется отстающим, поскольку он придерживается в большей степени прежнего дизайна, наряду с его 5-дюймовым Full HD экраном в 1920 х 1080 пикселей. Samsung и LG, с другой стороны, использовали Quad HD панели с разрешением 2560 х 1440 пикселей для ведущих флагманов, что является большим шагом вперед, ведь производители тоже перешли на металлические смартфоны. Тем не менее, не всё так плохо, и наш обзор HTC One M9 раскроет все детали.

Посмотрите на One M9 (слева) и One M8 (справа), вам придется постараться, чтобы отличить один от другого.

Что такое HTC One M9?

HTC One M9 является флагманским смартфоном тайваньского производителя. Каким же получился One M9? HTC на этот раз выбрала путь эволюции, а не революции. Дизайн смартфона напоминает предыдущую модель этой же линейки, да и экран почти такой же самый. Новыми являются камера, процессор и более мощная батарея. Все это обеспечивает большую часть аппаратных изменений. Программные изменения коснулись новой версии операционной системы Android 5.0 Lollipop и пользовательского интерфейса HTC Sense 7.

В итоге получился довольно неплохой смартфон, который, однако, имеет возможности для совершенствования. Не оправдывает ожидания задняя камера смартфона и батарея, тем не менее, это один из лучших смартфонов, который сегодня присутствует на рынке, и его выход показывает, каких успехов достиг HTC за последние годы, подняв свои смартфоны на такой высокий уровень.

HTC One M9: Дизайн

Смартфон обладает довольно необычным дизайном, основным фактором которого является то, что на передней поверхности металл золотисто-серебристый в нашем случае, а по бокам чистого золотистого цвета. Поверните телефон и цветовая гамма смениться, в ней будет преобладать серебристый оттенок.

Поверхность смартфона менее скользкая, чем у М8 и других изогнутых устройств, что упрощает его удержание в руке. Так что держать его в одной руке стало проще, но менее комфортно.

В большинстве же других параметров HTC One M9 является тем, что и можно ожидать от флагманской модели устройства. На нижнем крае смартфона размещен разъем MicroUSB и 3,5 мм вход для наушников. На передней панели располагается пара прекрасных решеток, за которыми скрываются динамики BoomSound, о которых мы поговорим немного позднее.

В целом же изменения дизайна, которые сделала HTC в М9, являются положительными. Эргономика улучшилась благодаря новой кнопке питания и узкому корпусу, однако некоторые эстетические изменения оказались менее успешными и более логичными они смотрелись в прошлогодней модели. В любом случае с уверенностью можно сказать, что смартфон выглядит действительно очень красиво.

HTC One M9 выпускается в трех цветовых решениях: бронзово-сером, серебристо-золотом и чисто золотом.

Дизайн и удобство использования

Если положить рядом HTC One M8 и M9 – прошлогодний и свежий флагманы компании, отличить их с первого раза сможет разве что работник компании. А ведь разница действительно минимальная – это не Samsung с их Galaxy S5 и S6, которые выглядят как продукты разных производителей, тут сохранена максимальная преемственность.

Общая идея дизайна, оформление и расположение элементов остались почти без изменений. Корпус HTC One M9 сделан из цельного куска алюминия, а фактура задней крышки сохраняет естественный для металла вид.

На лицевой стороне дисплею отдано не так много места – сверху и снизу есть широкие пластиковые решетки, под которыми скрываются знаменитые стереодинамики, а над нижним по-прежнему красуется логотип компании, удлиняющий корпус на пару лишних миллиметров.

Под верхней решеткой скрывается маленький световой индикатор. Справа от нее – прорезь для датчиков и крупный объектив фронтальной камеры.

Лотки для карты памяти и NanoSIM расположены в верхней части боковин, MicroUSB и 3,5 мм скученны снизу, а черная глянцевая вставка на верхнем торце скрывает инфракрасный порт для управления бытовой техникой.

Важные изменения, по сравнению c HTC One M9 можно перечислить по пунктам.

Первое. Клавиша включения спустя много лет встала на свое место, она находится под раздельными кнопками регулировки громкости справа. Так пользоваться смартфоном намного удобнее – не приходится тянуться до клавиши сверху. Конечно, хотелось бы чтобы кнопка располагалась немного выше, как раз под большим пальцем, но это место уже занято клавишами громкости.

Второе. HTC изменили форму боковых граней One M9. В M8 они были скруглены, а теперь стали острее. Как и в Galaxy S6 Edge, к условно острым боковинам нужно привыкнуть, лично я перестал обращать внимание на эту особенность через пару дней использования.

Третье. Главной особенностью One M8 была двойная камера. От нее решили отказаться, и заменить обычным модулем. Он слегка выступает над крышкой, но на фотографиях это выглядит хуже, чем в реальной жизни. К тому же, объектив защищает сапфировое стекло, так что за сохранность камеры можно не переживать.

Дополнительным изменением можно назвать новые расцветки корпуса, к которым добавили модного золота. HTC One M9 может быть полностью золотым (Gold on Gold), серебряным с золотыми боковинами (Gold on Silver), или полностью черным (Gunmetal Gray). Все расцветки имеют одинаковую фактуру крышки.

В остальном, One M9 – это один из самых металлических смартфонов на рынке, обилие металла отчетливо ощущается в руках. Как и раньше, он больше других моделей с экранами диагональю 5 дюймов, но им можно нормально управлять одной рукой.

HTC One M9: Экран

1920 х 1080; Super LCD 3; Corning Gorilla Glass 4

Экран у HTC One M9 практически полностью идентичен своему предшественнику, хотя и с более тонким обрамлением. Экран имеет разрешение Full HD. Плотность пикселей составляет 441ppi, что делает изображение более насыщенным, чем на дисплее Retina 326ppi на iPhone 6. Кроме того, дисплей 2К лучше экономит энергию батареи.

Единственное, что хотелось бы улучшить в будущем, так это переход от LCD-технологии к технологии AMOLED-дисплеев, как это сделала Samsung. Но и LED 3 представляет достойную контрастность. Просмотр фильма на пятидюймовом дисплее комфортен, все сцены выглядят убедительно, демонстрируя хорошую глубину цвета.

Дисплей

HTC не стали гнаться за высокими разрешениями и установили в свой флагман традиционно хороший SuperLCD3 дисплей диагональю 5 дюймов и разрешением 1920 на 1080 точек (441 ppi). Экран прикрыт стеклом Corning Gorilla Glass 4.

Яркость экрана изменяется от 8 до 418 кд/м², измеренная контрастность – 1:773. Качество заводской калибровки на хорошем уровне – цветовой охват соответствует пространству sRGB, цветовая температура слегка завышена, а гамма кривая с небольшими перепадами.

Экран поддерживает управление в перчатках, которое пригодится в холодное время года. Возможность управления жестами никуда не делась – чтобы включить или выключить экран достаточно двойного постукивания. Кроме этого, простым свайпом можно сразу разблокировать экран, открыть ленту BlinkFeed или запустить голосовое управление.

Экран производит очень приятное впечатление. Автоматическая регулировка яркости в большинстве случаев работает корректно, запаса подсветки достаточно как для работы в темноте, так и для яркого солнечного дня, олеофобное покрытие позволяет быстро удалить отпечатки. У дисплея очень спокойная цветопередача – цвета максимально приближены к естественным, нет никаких кричащих ярких оттенков, которые свойственны AMOLED дисплеям и отдельным IPS-матрицам. От экрана HTC One M9 остаются только приятные впечатления.

HTC One M9: Динамики и качество звука

Фронтальная стереодинамики BoomSound с Dolby Audio

Пока Вы сами не услышите звук этих динамиков, Вы не поймете, насколько они хороши. One M9 продолжает традицию включения в смартфон фронтальных стереодинамиков со встроенным усилителем и функцией Dolby Audio, чего нет у его конкурентов.

Фронтальные динамики предлагают достойное стереоразделение звука, а уровень громкости вполне позволяет насладиться прослушиванием музыки не только дома, но и на открытом воздухе. На сегодняшний день это лучшие динамики, которые можно встретит в смартфонах.

HTC One M9: Производительность

Qualcomm Snapdragon 810 восьмиядерный; 3 Гб оперативной памяти

Snapdragon 810 использует архитектуру big.LITTLE. Это значит, что используется два процессора: 1,55 ГГц четырехъядерный процессор решает общие задачи, а более мощный, 1.96 ГГц четырехъядерный процессор предназначен для управления более энергоемкими задачами. Преимущества этого являются не только увеличение мощности, но и большая энергетическая эффективность.

Но, как и можно ожидать, Snapdragon 810 и 3 Гб оперативной памяти помогает One М9 очень быстро справляться с повседневными задачами.

HTC One M9: Игры

Мы протестировали HTC One M9 с некоторыми из самых требовательных игр на Google Play. Интенсивные 3D-гонки, как Asphalt и Real Racing 3 работают безупречно, никаких зависаний нами замечено не было. Несколько зависаний было на Riptide 2, но этого недостаточно для негативного впечатления.

Единственное, что нам не понравилось, так это излишний нагрев One M9 после длительной игровой сессии. Сказываются проблемы с перегревом процессора Snapdragon 810 при интенсивных задачах.

HTC One M9: приложения

Sense 7: Sense Home

Новый флагманский аппарат HTC работает под управлением операционной системы Android 5.0 Lollipop с интерфейсом Sense 7. Самой полезной новой функцией нами признана Sense Home, которая позволяет собрать на главном экране значки приложений, которые Вы используете чаще всего. При этом Sense 7 все делает автоматически, меняя популярные приложения в зависимости от частоты обращений к ним.

Sense 7: Темы

Новый интерфейс позволяет настраивать не только экран блокировки на свой вкус, но и остальные параметры отображения изображений экрана смартфона. В самом устройстве имеются предустановленные темы, однако пользователь может скачать новые или даже создать свою собственную.

Помимо этого с новым интерфейсом, Вы получаете множество других полезных приложений, таких как Cloudex, Peel Smart Remote, Kid Mode, музыкальное приложение HTC Music и другие.

⇡#Дисплей

HTC One A9 получил 5-дюймовый AMOLED-дисплей разрешением 1920 × 1080 точек. Плотность пикселей – 443 точки на дюйм, мультитач — 10-точечный. Есть режим работы в перчатках. Никаких заигрываний со сверхвысоким разрешением, все довольно стандартно. AMOLED-экраны принято хвалить за условно бесконечную контрастность (справедливо) и ругать за неестественные цвета (не всегда справедливо). Экран One A9 как раз показывает, почему мнение об OLED как о дисплеях с заведомо неточной цветопередачей по меньшей мере устарело.

Помимо настройки яркости, где можно отключить автоподстройку под внешнее освещение, здесь доступны несколько цветовых профилей: AMOLED, sRGB, холодные и теплые оттенки. Сначала поговорим о профиле AMOLED, который производитель рекомендует использовать как основной.

Показатели по яркости у режимов не сильно различаются, при включенном AMOLED, в частности, максимальная яркость составила 377 кд/м2, минимальная – 26 кд/м2. Экран не слишком яркий, но не «прожигает» глаза в темноте и при этом серьезных проблем при использовании смартфона в солнечную погоду нет — из-за отсутствия воздушной прослойки бликует экран слабо. Светимость черного поля, естественно, нулевая.

HTC One A9, показатели замеров параметров дисплея в цветовом профиле AMOLED

А вот дальше начинаются расхождения. В режиме AMOLED cредняя гамма составляет 2,25, а цветовая температура находится в зоне 7100-7200 К, оттенки чуть холоднее, чем нужно. Но обратите внимание на более широкий цветовой охват, нежели стандартный sRGB, под который заточено сегодня почти все. В итоге средняя ошибка Delta E по цветам составляет 7,35, что, конечно, находится за пределами нормы. Экран не слишком точен по цветопередаче.

HTC One A9, показатели замеров параметров дисплея в цветовом профиле SRGB

Но стоит включить «не рекомендованный» режим sRGB, как мы видим настройки, близкие к эталонным. Гамма — 2,19, это значение мало зависит от профиля. А вот цветовая температура зависит прямым образом, и здесь мы видим почти оптимальную цифру 6800 (при эталоне в 6500 К), цвета по-прежнему слегка холоднее, но совсем не значительно. И главное, цветовой охват практически соответствует sRGB – с минимальными же отклонениями «внутри треугольника». Ошибка Delta E – 1,33! Этот экран удовлетворит любого калибровщика. Как видите, дело в настройках, а не технологии. То есть если вы любите не совсем естественные, чуть более насыщенные цвета, выбирайте профиль AMOLED или теплые/холодные цвета, в зависимости от предпочтений. Если хотите видеть максимально точную и естественную картинку – просто ставьте sRGB.

Но у экрана есть не слишком приятная особенность, не отмеченная в наших измерениях, – заметное изменение оттенков, можно даже сказать, их «похолодание» уже при небольшом изменении угла обзора.

HTC One M9: Связь

В отличие от Apple и Samsung оборудовал свой флагман слотом microSD, который позволяет дополнить 32 Гб собственной памяти смартфона. Кроме того, владельцу One M9 предоставлено 100 Гб свободного места на Google Drive в течение двух лет.

Помимо этого смартфон обладает традиционной поддержкой Wi-Fi (802.11 a/b/g/n/ac) MHL 3.0 для подключения к телевизору с помощью кабеля, 4G, Bluetooth 4.1 и инфракрасный излучатель для превращения устройства в пульт дистанционного управления и наушники, идущие в стандартной комплектации.

HTC One M9: камера

Если говорить о характеристиках камеры устройства, то они слишком противоречивы, хотя и лучше, чем было в HTC One M8.

One M9 имеет камеру 20,7 мегапикселей, что звучит здорово. К примеру, iPhone 6 имеет только 8 мегапикселей. Но большим разочарованием становится отсутствие оптической стабилизации изображения.

Приложение камеры переполнено разными функциями: съемка спереди и сзади, панорамная съемка, фото нескольких снимков с небольшой задержкой и другие функции.

Помимо этого пользователю предлагаются разные функции обработки изображений, такие, как фильтры, рамки и разнообразные эффекты. К примеру, двойная экспозиция позволяет смешивать два разных фото, или добавлять на сделанное фото элементы других изображений.

Тесты камеры показывают, что при ярком свете теряется детализация и отображение света. При низкой освещенности также получаются фото не самого лучшего качества, но при нормальных условиях для съемки фотографии получаются фантастическими.

Передняя камера лучше, чем у конкурентов, Galaxy S5 и iPhone 6 Plus. Если Вы любитель селфи, то 4-мегапиксельная камера Ultrapixel придется Вам по вкусу.

С HTC One M9 можно снимать видео 4K до шести минут и воспользоваться режимом замедленной съемки. Качество видео удовлетворительное, но оно страдает от тех же проблем, которые есть у камеры.

Камеры

Потенциально интересная Duo Camera c ультапикселями оказалась главным недостатком One M8, в HTC One M9 для основной камеры используется обычный модуль, а ультрапиксели переехали во фронтальную камеру.

В качестве основной камеры используется BSI сенсор с разрешением 20 Мп. Вспышка двухтонная светодиодная, объектив 27.8mm f/2.2 защищает сапфировое стекло. Фронтальная камера имеет следующие характеристики: 4 Мп, HTC UltraPixel, BSI, f/2.0, 26.8mm.

По сравнению с M8 виден прогресс – качество снимков действительно улучшилось, как минимум за счет возросшей детализации.

На практике, в обычных неидеальных условиях съемки все не так однозначно. Наверняка можно сказать, что камера в HTC One M9 уступает лучшим современным фото-флагманам уровня Galaxy S6 или iPhone 6. В сложных условиях аппарат может промахнуться с фокусировкой, ошибочно определить баланс белого. Кроме этого, нужно поработать над скоростью фокусировки – по этому параметру смартфон тоже уступает конкурентам.

Сказанное окажется важно, если качество камеры смартфона играет для вас важную роль, а снимки изучаются и обрабатываются на компьютере. Кадры, сделанные в ясную погоду, выглядят хорошо. Плюс не стоит списывать со счетов то, что смартфон только выходит на рынок, наверняка в будущих обновлениях качество съемки улучшат.

Фронтальную камеру наоборот, уже сейчас можно назвать одной из лучших.

Среднее по меркам флагманов качество основной камеры немного компенсирует софт. К имеющимся режимам съемки можно добавлять новые, есть функциональный встроенный редактор.

HTC One M9: Выносливость батареи

В One M8 довольно хороший аккумулятор, так что по логике в M9 должен быть лучше. Тем более что Qualcomm заявляет, что Snapdragon 810 тратит меньше энергии, чем 801 на М8. Кроме того, он имеет аккумулятор с емкостью 2840 мАч, против 2600 мАч у One M8. Однако в тестах эти два смартфона показывают приблизительно одинаковые отметки.

День интенсивного использования, включая час спутниковой навигации, три часа просмотра веб-страниц, час видео и два часа 3D-игр позволяют полностью разрядить батарею за 13 часов. При привычном же режиме использования один день разрядит батарею всего на 50%.

Как и большинство флагманских смартфонов сегодня, HTC One M9 вышел с несъемным аккумулятором, но также как и Galaxy S6, аппарат использует функцию быстрой зарядки, которая позволяет зарядить аккумулятор на 60% за 30 минут.

⇡#Камера

HTC One A9, блок основной камеры
После ультрапиксельных экспериментов One M7 и One M8 к камерам смартфонов HTC принято относиться с опаской и даже немного снисходительно. По крайней мере, 20,7-мегапиксельный модуль One M9 выглядит в сравнении с конкурентами совсем неубедительно. HTC, судя по всему, не хуже нас с вами понимает это – и использует на One A9 уже другую, 13-мегапиксельную камеру без «наворотов» вроде ультрапикселей и «двойной» съемки.

С этой матрицей работает объектив светосилой f/2.0 с оптической стабилизацией. Автофокусировка – обычная контрастная, без помощи модного лазера. Вспышка – двойная светодиодная. Блок камеры расположен по центру в верхней части спинки смартфона и слегка выступает над корпусом, что совсем не критично для удобства его использования. Скорее наоборот – так объектива чуть реже касаешься рукой, меньше вероятность оставить на нем отпечатки, губительно сказывающиеся на качестве снимков.

Переключаться между режимами работы камеры можно двумя способами: быстро листая экраны «свайпом» или через специальное подменю. Выбирать есть из чего: кроме переключения между основной и фронтальной камерами здесь есть стандартная панорама, замедленная и ускоренная съемка, а также режим «Профи», в котором можно не только менять основные настройки съемки, но и сохранять фото в формате RAW. Помимо ускоренной и замедленной съемки, HTC One A9 пишет обычное видео в Full HD-разрешении.

Возможности, предоставляемые форматом RAW, можно использовать, не прибегая к помощи фоторедактора на компьютере – смартфон пытается «улучшить» фото, как правило, вытягивая тени. Получается, в принципе, неплохо, хотя надо смотреть по ситуации. Отметим, что один снимок в формате RAW весит 25 Мбайт – с учетом ограниченного места в памяти смартфона не стоит ими злоупотреблять. Либо купите максимально объемную карту памяти и расслабьтесь.

Снимки HTC One A9 делает в максимальном разрешении 13,1 мегапикселя, достижимом в формате 4:3. Сравним кадры, сделанные One A9 и сегодняшним лидером по смартфонной фотосъемке – Samsung GALAXY S6 edge+.

Слева – снимок, сделанный на Samsung GALAXY edge+, справа – снимок, сделанный на HTC One A9
Слева – снимок, сделанный на Samsung GALAXY edge+, справа – снимок, сделанный на HTC One A9

Камера HTC One A9 определенно работает лучше, чем у HTC One M9/M9+, — в первую очередь за счет естественной и стабильной цветопередачи, нормального баланса белого и неплохого сочетания детализации при съемке с нормальным освещением и приемлемых шумов при съемке в темноте.

HTC One A9

Смотреть все изображения (15)

По контурной резкости и способности вытягивать детали при слабом освещении HTC явно уступает топовому Samsung, но в остальном тайваньский смартфон практически не уступает конкурентам. Добавим, что за счет оптического стабилизатора можно снимать на чуть более длинных выдержках, не задирая ISO, – что, конечно, помогает при съемке в плохом освещении.

HTC One A9, пример съемки на фронтальную камеру

Ультрапиксели переехали на фронтальную камеру – и это как раз очень хорошо. При 4-мегапиксельном разрешении в отсутствие автофокуса и вспышки селфи получаются весьма приличные. Детализации и четкости вы от них не дождетесь, но вполне приятного тона кожи в сочетании с не самым страшным шумом при съемке в темноте – наверняка. На месте и традиционное сглаживание кожи для желающих выглядеть словно с применением мягкого фокуса.

Сравнение HTC One M9 и HTC One (M8)

Рейтинг

Приём сигнала:

87

Сим-карта Тип и размер симкарты. Если вы привыкли пользоваться другой, вам придётся обрезать или сменить у оператора симку.
  • Nano-SIM (4FF — четвертый форм-фактор, с 2012 года, 12.30 x 8.80 x 0.67 мм)
  • Nano-SIM (4FF — четвертый форм-фактор, с 2012 года, 12.30 x 8.80 x 0.67 мм)
Количество сим-карт Число слотов под сим-карты. Обратите внимание, что разные производители по-разному реализуют работу нескольких сим одновременно. 1 1
GSM Стандарт цифровой мобильной связи, используемый в большинстве стран.
  • GSM 850 MHz
  • GSM 900 MHz
  • GSM 1800 MHz
  • GSM 1900 MHz
  • GSM 850 MHz
  • GSM 900 MHz
  • GSM 1800 MHz
  • GSM 1900 MHz
UMTS Следующее поколение цифровой связи с сетями 3G. Отличается более высокой скоростью передачи информации.
  • UMTS 900 MHz
  • UMTS 1900 MHz
  • UMTS 2100 MHz
  • UMTS 850 MHz
  • UMTS 900 MHz
  • UMTS 1700/2100 MHz
  • UMTS 1900 MHz
  • UMTS 2100 MHz
LTE Стандарт высокоскоростной связи. Обязательно сверьте частоты вашего оператора и поддерживаемые девайсом частоты. LTE будет работать только в сети с совпадающими частотами.
  • LTE 800 MHz
  • LTE 850 MHz
  • LTE 900 MHz
  • LTE 1800 MHz
  • LTE 2100 MHz
  • LTE 2600 MHz
  • LTE-TDD 2300 MHz (B40)
  • LTE-TDD 2500 MHz (B41)
  • LTE-TDD 2600 MHz (B38)
  • LTE 700 MHz
  • LTE 700 MHz Class 17
  • LTE 800 MHz
  • LTE 900 MHz
  • LTE 1700/2100 MHz
  • LTE 1800 MHz
  • LTE 1900 MHz
  • LTE 2100 MHz
  • LTE 2600 MHz
5G Пятое поколение мобильной связи. Обеспечивает не только увеличенную пропускную способность, но и новые режимы, например, прямое соединение между устройствами. Нет данных Нет данных
Дополнительно
  • UMTS (384 kbit/s )
  • EDGE
  • GPRS
  • HSPA+ (HSUPA 21.1 Мбит/с , HSDPA 42.2 Мбит/с )
  • LTE Cat 6 (51.0 Mbit/s , 301.5 Mbit/s )
  • UMTS (384 kbit/s )
  • EDGE
  • GPRS
  • HSPA+ (HSUPA 5.76 Мбит/с , HSDPA 42 Мбит/с )
  • LTE Cat 4 (51.0 Mbit/s , 150.8 Mbit/s )
  • LTE-A (500 Mbit/s , 1 Gbit/s )
  • EV-DO Rev. A (1.8 Mbit/s , 3.1 Mbit/s )
Навигация Стандарты поддерживаемых спутниковых систем навигации. Самая распространённая — GPS, в России есть своя ГЛОНАСС, в Китае — Бэйдоу.
Wi-Fi Поддерживаемые стандарты Wi-Fi. Возможно, ваш роутер работает в ином режиме.
  • 802.11a (IEEE 802.11a-1999)
  • 802.11b (IEEE 802.11b-1999)
  • 802.11g (IEEE 802.11g-2003)
  • 802.11n (IEEE 802.11n-2009)
  • 802.11n 5GHz
  • 802.11ac (IEEE 802.11ac)
  • Dual band
  • Wi-Fi Hotspot
  • Wi-Fi Direct
  • 802.11a (IEEE 802.11a-1999)
  • 802.11b (IEEE 802.11b-1999)
  • 802.11g (IEEE 802.11g-2003)
  • 802.11n (IEEE 802.11n-2009)
  • 802.11n 5GHz
  • Dual band
  • Wi-Fi Hotspot
  • Wi-Fi Direct
Версия bluetooth
Функции bluetooth
Подключения к другим устройствам Технологии, доступные для сопряжения с другими девайсами, например, NFC.
  • Computer sync
  • OTA sync
  • Tethering
  • DLNA
  • NFC
  • Computer sync
  • OTA sync
  • Инфракрасный порт
  • Tethering
  • DLNA
  • NFC
USB Разъём, используемый для зарядки, влияет на скорость передачи данных. Подойдёт только совместимый кабель. Micro USB Micro USB
Опции USB Функции, доступные при подключении через USB.

5 основных преимуществ HTC One M9

Нынешний год порадовал ценителей смартфонов появлением очередной новинки от HTC. Привлекательный Android-флагман выделился на фоне конкурентов многочисленными неоспоримыми преимуществами.

Стоимость HTC One M9 начинается от 16997 гривен. Изучить подробные характеристики смартфона и отзывы о нем можно на сайте известного прайс-агрегатора. Возможность купить НТС Ван М9 на прайс юа отсутствует. Сайт создан специально для того, чтобы быстро и удобно сравнивать ценовые предложения от разных продавцов. После выбора самого оптимального варианта, останется только перейти по ссылке и оформить покупку.

Рассмотрим пять преимущественных отличий нового смартфона

1. Мощнейший аккумулятор

Новая разработка HTC получила аккумулятор, который отличается довольно-таки приличным запасом — 2840 мА-ч. Для смартфона данной категории подобный объем является очень внушительным. Весомым аргументом для выбора HTC One M9 будет время его автономной работы. Тестирования показали, что при выключенных режимах сбережения энергии и неактивных дополнительных настройках телефон может похвастаться хорошей выносливостью. Причем в полностью идентичных условиях этот показатель в два раза больше по сравнению с iPhone 6, в полтора – с Samsung Galaxy S6, что много о чем говорит.

2. Непревзойденный звук

Идеальный во всех смыслах этого слова звук, которым отличается смартфон One M9, без сомнений порадует любого меломана. Один из главных козырей устройства – сильные внешние динамикиBoomSound. На этот раз их оснастили дополнительным бонусом – системой Dolby Audio. Если подключить к телефону наушники сторонней фирмы, звук все равно остается на высоте, несмотря на то, что родная звуковая надстройка отключается. Высокий запас громкости, отличная выраженность средних басов и частот обеспечат качественное прослушивание любимых треков.

3. Честный экран

Возможно, это достоинство оценит не каждый, но в отличие от смартфонов других известных марок,HTC One M9 имеет так называемый честный экран. Он не заваливает контрасты, не искажает цветопередачу, отображая очень реалистичные изображения. Углы обзора, яркость и качество картинок заслуживают самый высший балл.

4. Отличная скорость и производительность

Новинка от HTC успела заслужить звание скоростного устройства, как по программным, так и по техническим параметрам. Во многом это заслуга 8-ядерного процессора Qualcomm Snapdragon. Значительное преимущество над конкурентами дает новый графический ускоритель, благодаря которому поддерживается большинство игр, в том числе и 3D. Также стоит опровергнуть распространенную информацию о сильном нагреве телефона. В финальной прошивке разработчики наладили температурный режим процессора, немного исправив частоты.

5. Удобный гибкий интерфейс

Еще одно преимущественное качество смартфона – графическая оболочка Sense 7, которая сделала интерфейс лучше и удобнее всех предыдущих. Новый Sense позволяет вносить изменения в любые настройки и самостоятельно разрабатывать внешний вид телефона. Самым интересным нововведением стал виджет для основного рабочего стола. Его особенность в умении подстраиваться под местонахождение и характер поведения пользователя. Эта полезная функция предлагает нужные программы под конкретные обстоятельства, значительно сокращая время на их поиск.

HTC One M9 – смартфон с отличными показателями продолжительности автономной работы, качественным дисплеем и серьезной аудио составляющей. Делая вывод, можно отметить, что новый флагман может стать очень достойной покупкой.

Чехлы для HTC One / M9

Использование смартфона сопряжено с риском повреждения гаджета, вследствие неосторожного обращения или из-за проникновения внутрь пыли и грязи. Чтобы устройство прослужило дольше, лучше сразу позаботиться о его защите.

Для чего нужен чехол на HTC One / M9 

Чехлы для HTC One / M9 выполняют такие функции:

  • защита от царапин, потертостей и ударов;
  • препятствие проникновению внутрь пыли, грязи и влаги;
  • предотвращение скольжения в руке;
  • придание смартфону индивидуальности.

Покупка качественного чехла на эйчтиси ван м9 с высокими защитными характеристиками сэкономит вам значительные средства на ремонт или даже избавит от необходимости приобретать новый гаджет.

Разновидности чехлов:

  • бамперы;
  • накладки;
  • книжки;
  • футляры.

Бамперы и накладки для HTC One / M9

Бампер закрывает боковые грани смартфона, по своей сути являясь своеобразной рамкой. Поскольку гаджет чаще всего падает на бок, то он может уберечь его от серьезной поломки. Такое изделие приподнимает телефон над ровной поверхностью, поэтому на смартфоне не появляются потертости. Другим достоинством является то, что такое приспособление сохраняет дизайн устройства и не влияет на его размеры.

Однако, бампер имеет и серьезный недостаток. Он не закрывает передней и задней поверхности смартфона, а значит, не убережет их от царапин.

Накладки, или крышки, чаще всего изготавливаются из пластика или силикона. Такие модели защищают заднюю поверхность и бока смартфона. Пластиковые изделия фактически не добавляют аппарату веса и громоздкости. Они отлично защищают от грязи, пыли, появления потертостей и царапин. Однако, в случае падения пластиковая крышка не защитит.

Силиконовый чехол для HTC One M9 — хорошая страховка на случай падения. Он амортизирует удары, благодаря толстому слою эластичного материала. Также данная разновидность защищает от негативного воздействия окружающей среды.

Основной недостаток накладок — они оставляют открытым экран, и без специальной защитной пленки дисплей быстро покроется царапинами. Однако, при этом накладки очень долговечны.

Хотите оригинальный чехол для эйчтиси ван м9? Закажите пластиковую или силиконовую накладку с собственным принтом. Для этого достаточно выбрать картинку и определиться с материалом. Интернет-магазин «Вчехле» изготовит аксессуар в кратчайшие сроки. Подчеркните свою индивидуальность и придайте своему смартфону запоминающийся дизайн.

Какой материал лучше для нанесения принта? С силиконовых накладок рисунок со временем может стираться, а вот пластиковые сохранят изображение в первозданном виде.

Чехлы-книжки и футляры на HTC One / M9

Чехол-книжка для HTC One M9 — фаворит деловых людей. Такие аксессуары чаще всего изготавливаются из кожи, благодаря чему аксессуар выглядит дорого и стильно. Данная разновидность защищает смартфон со всех сторон: в отличие от бампера, с «книжкой» не приходится опасаться царапин на экране. Существуют модели с встроенным магнитом, которые сами разблокируют гаджет при открытии крышки.

Изделие максимально защищает телефон при падении и переноске вместе с другими вещами. Однако, данные модели увеличивают размер смартфона, а откидная крышка не всегда удобна.

Купить чехол для эйчтиси ван м9 в Украине очень просто, если заказывать его в интернете. Так вы избавите себя от траты времени на поиски, а ассортимент будет больше, чем в обычной точке продажи. Цена при покупке в сети будет ниже, чем за то же изделие в стационарном дилерском центре аксессуаров.

Футляр пригодится, если вы не хотите утяжелять смартфон, но хотите обезопасить его на время переноски в кармане или сумке. Однако для использования придется каждый раз вынимать смартфон, а данная разновидность не поможет, если вы уроните гаджет во время разговора.

Как дополнительно защитить HTC One / M9

Даже с чехлами-книжками, закрывающими дисплей, есть риск того, что владелец неосторожно заденет его ногтем, и тогда на экране останется след. Если вы хотите, чтобы телефон был надежно предохранен от всех негативных влияний извне, лучше дополнительно наклеить на экран пленку.

Какие бывают пленки для экрана?

  • матовые;
  • глянцевые.

Если вы остановитесь на матовом варианте, изображение не будет бликовать, а отпечатки пальцев будут незаметны. Однако, такие пленки делают картинку немного менее четкой. Глянцевые пленки не влияют на картинку на экране и фактически незаметны, но могут бликовать на солнце.

Также полезным аксессуаром от попадания внутрь пыли и грязи станет заглушка. Этот аксессуар вставляется в отверстие для наушников. Заглушки удобны в использовании, а производители часто придают им оригинальный дизайн, который украсит телефон и подчеркнет индивидуальность владельца.

Эти и другие чехлы для HTC можно найти в нашем магазине в очень большой ассортименте.

Htc one м9 — картинки

Htc one м9 — картинкиформула один f1 красный бык гонки себастьян феттель соединенные штаты gp формула 1 болид

1920 x 1080, 179 кБ

во весь экрансохранитьформула один f1 красный бык себастьян феттель болид гонки формула 1

1920 x 1080, 200 кБ

во весь экрансохранитьформула формула один f1 китайский гп шанхай 2011 ferrari 150 italia фернандо алонсо формула 1 ф1 китай феррари гонщик пилот трасса поворот

1920 x 1280, 359 кБ

во весь экрансохранитьsuelyn medeiros на стулях одна

1280 x 1024, 199 кБ

во весь экрансохранитьвокзал грусть вечер одна

1920 x 1540, 447 кБ

во весь экрансохранитьформула -1 формула-1 f1 формула один чемпионат по кольцевым автогонкам болид гоночный автомобиль команда renault рено красный бык трек гонки ✌ .

1920 x 1280, 298 кБ

во весь экрансохранитьгрот никто кроме нас

1920 x 1080, 451 кБ

во весь экрансохранитьчелси игроки команда номер один эмблема

1920 x 1080, 214 кБ

во весь экрансохранитьдисней pixar университет монстров корпорация монстров монстры кровать зеленый синий одноглазый улыбка брекеты майк вазовский спящий монстр

2133 x 1200, 296 кБ

во весь экрансохранитьарт самолет королевский авиационный завод se5a одноместный истребитель биплан один из лучших английских истребителей первой мировой войны ввс великобритании первая мировая .

1920 x 1200, 409 кБ

во весь экрансохранитьшахматы и один в поле воин

1920 x 1200, 164 кБ

во весь экрансохранитьвоенный историческая клуб самолет у-2 по-2 совестский многоцелевой биплан созданный под руководством н. н. поликарпова 1928г. один из самых массовых самолетов в мире 1942г. второй мировой войны частна

1920 x 1276, 158 кБ

во весь экрансохранить

Ещё картинки

открыть корзинуочистить корзину

В HTC сменился гендиректор | Журнал Digital World

Генеральным директором HTC, видного тайваньского производителя электроники, стала Шер Ван, одна из основательниц компании, занимавшая ранее пост председателя ее совета директоров.

Между тем Питер Чоу, предыдущее «первое лицо» HTC, ушел в отставку. При этом г-н Чоу не покинет HTC: он возглавит Future Development Lab, подразделение, занимающееся разработкой новых технологий для будущих продуктов компании. Стоит отметить, что пару лет назад часть полномочий Питера Чоу уже отошла к Шер Ван, а теперь самые важные для HTC решения она станет принимать самостоятельно.

Питер Чоу и Шер Ван

О причинах такой «рокировки» можно только догадываться, хотя, откровенно говоря, HTC уже давно нуждалась в смене «генеральной линии». Сделать это можно было, видимо, только с помощью смены высшего руководителя. Зачем HTC что-то менять? Лучшим ответом на этот вопрос, пожалуй, является «P.S. от Сергея Вильянова» к обзору HTC One M8 от апреля 2014 года. Приводим фрагмент без купюр:

«Давным-давно, аж три года назад, жила-была хорошая тайваньская компания HTC. Начав с производства устройств для крупных брендов, она набралась смелости и раскрутила свой собственный, изрядно в этом преуспев. Сочетая изобретательность и чувство меры, компания делала объективно лучшие смартфоны на Windows Mobile и Android. По объемам продаж ей трудно было конкурировать с теми же корейцами, но положение законодателя моды тоже дорогого стоит. И вот однажды показалось руководству HTC, что компания достигла уровня Apple. И надо СООТВЕТСТВОВАТЬ.

Мне кажется, падение HTC началось, когда она выложила немалые деньги за часть прав на бренд Beats Audio. Хороший бренд, спору нет. Вот только существовал он только в рекламных объявлениях да на коробках с наушниками. Ни одного инженера в Beats сроду не работало. И потому покупка была насколько эффектной, настолько и бессмысленной. Сделать усилитель басов могли сделать силами инженеров самой HTC. Что, в общем, и произошло. Пожалуй, единственным полезным результатом покупки стала недавняя тихая продажа прав на Beats, позволившая HTC удержаться на плаву.

Со второй половины 2011 года HTC начала плодить сущности, выпуская один скучный смартфон за другим. Последним, запавшим мне в душу, был Incredible S. Флагманский HTC One X оказался неудачным из-за выбора аппаратной платформы: при всем уважении к Nvidia, чипсет Tegra 3 не был пригоден для использования в смартфонах из-за завышенного энергопотребления и склонности к перегреву, так что One X получился провальным. В HTC One обещали чудо-камеру, но она оказалась, мягко говоря, никакой. Выпуская же One (M8) с ней же, поставив по соседству еще одно слабосильное чудище, HTC открыто говорит: ребята, в нашем мире такие смартфоны, да еще и по сумасшедшим ценам – идеальны! Не хотите – не покупайте!

Я не хочу. Мне кажется чуть странным, когда слабость инженерной и маркетинговой мысли пытаются замаскировать алюминиевым корпусом. Я помню времена, когда HTC хватало талантов в обеих этих ипостасях. А теперь на проталкивание M8 в массы уже банально может не хватить денег.

И главный вопрос – будет ли M8 последним флагманом HTC? Или все же хватит сил на M9?»

Сил, как мы знаем, хватило, но для создания М10, видимо, решили сменить гендиректора. Чтобы М10 не был похож на М9 так же, как М9 похож на М8. Такая «преемственность» нравится далеко не всем, и кое-кто даже называет ее не преемственностью, а отсутствием идей. Посмотрим, что получится у г-жи Ван.

 

Нетифоидные инфекции кровотока, вызванные Salmonella, в Кисанту, ДР Конго: появление O5-отрицательной Salmonella Typhimurium и обширная лекарственная устойчивость


Фон:

Нетифоидная сальмонелла (NTS) является основной причиной инфекции кровотока (BSI) в Африке к югу от Сахары. Это исследование было направлено на оценку его продольной эволюции как причины BSI, его распределения серотипов и его структуры устойчивости к антибиотикам в Кисанту, ДР Конго.


Методы:

В рамках национальной сети эпиднадзора у пациентов с подозрением на ИБС, поступивших в специализированную больницу Кисанту в 2015-2017 гг., Были взяты образцы крови. Посевы крови производились в соответствии с международными стандартами. Результаты сравнивались с аналогичными данными, начиная с 2007 года.


Полученные результаты:

В 2015-2017 гг. НТС (n = 896) представляли собой основную причину ИБС.NTS были изолированы от 7,6% из 11764 подозреваемых и 65,4% из 1371 подтвержденного BSI. У детей младше 5 лет NTS составлял 9,6% подозреваемых BSI. Эти данные соответствовали данным предыдущих периодов эпиднадзора, за исключением доли подтвержденного ИБС, которая была ниже в предыдущие периоды эпиднадзора. На Salmonella Typhimurium приходится 63,1% NTS BSI, а на Salmonella Enteritidis — 36,4%. Из всех Salmonella Typhimurium 36,9% не экспрессировали O5-антиген (т.е. вариант Копенгаген). O5-отрицательные Salmonella Typhimurium были редкими до 2013 г., но с тех пор их число постепенно увеличивалось.Множественная устойчивость наблюдалась у 87,4% из 864 изолятов NTS, пониженная чувствительность к ципрофлоксацину — у 7,3%, устойчивость к цефтриаксону — у 15,7% и устойчивость к азитромицину — у 14,9%. В общей сложности 14,2% изолятов NTS, которые все представляли собой Salmonella Typhimurium, обладали множественной лекарственной устойчивостью и сочетали устойчивость к цефтриаксону и азитромицину. Эти изоляты сальмонелл были названы широко устойчивыми к лекарствам. По сравнению с предыдущими периодами наблюдения увеличилась доля изолятов NTS с устойчивостью к цефтриаксону и азитромицину и пониженной чувствительностью к ципрофлоксацину.


Заключение:

Как и в предыдущие периоды наблюдения, НТС занял первое место как причина ИБС у детей. Возникновение O5-отрицательной Salmonella Typhimurium необходимо рассматривать в свете разработки вакцины. Вызывает беспокойство высокий уровень устойчивости к антибиотикам.

Остатки противомикробных препаратов, нетифоидные Salmonella, Vibrio spp.и связанные с ними микробиологические риски в креветках, приобретенных в розничной торговле в Хошимине (Вьетнам)

Основные моменты

Наивысшая распространенность остатков антимикробных препаратов, обнаруженных в креветках из супермаркетов.

75% проб были заражены нетифоидной Salmonella (NTS).

Изоляты из образцов с остатками противомикробных препаратов имели самую высокую распространенность фенотипической устойчивости.

Активность бета-лактамаз расширенного спектра обнаружена в 28,1% изолятов V. parahaemolyticus .

Реферат

Мы исследовали остатки противомикробных препаратов, нетифоидные Salmonella (NTS), Vibrio spp. и связанная с ними устойчивость к противомикробным препаратам (УПП) у креветок, закупленных на месте в Хошимине (Вьетнам). Кроме того, мы исследовали взаимосвязь между AMR в NTS, Vibrio spp.и остаток антимикробного препарата в том же образце. Всего было выращено 40 образцов голов / панцирей креветок из различных розничных источников с использованием стандартов ISO 6579–1: 2017 (NTS) и ISO / TS 21872–1: 2007 ( Vibrio spp.). Фенотипическую чувствительность к противомикробным препаратам исследовали с использованием Vitek (NTS, 34 противомикробных препарата) и дисковой диффузии ( Vibrio spp., 12 антимикробных препаратов). Всего 9 (22,5%) образцов содержали остатки антимикробных препаратов, включая тетрациклины, фторхинолоны, сульфаниламиды и макролиды (в 7.5%, 7,5%, 2,5% и 2,5% образцов соответственно). Образцы креветок из супермаркетов имели более высокую распространенность остатков противомикробных препаратов, чем образцы, купленные на уличных рынках (50% против 13,3%) ( p = 0,049). Всего 30 (75%) проб были загрязнены НТС. Все образцы содержали видов Vibrio , из которых наиболее часто встречались V. parahaemolyticus (87,5% образцов). В общей сложности 58,9% изолятов NTS обладали множественной лекарственной устойчивостью. Что касается первоочередных, критически важных противомикробных препаратов, то самая высокая резистентность соответствовала хинолонам (14.4–47,8%), за которыми следуют цефалоспорины 3 и 4 поколения (3,3–7,8%). Vibrio spp. Изоляты отличались высокой устойчивостью к ампициллину (82,7%) и цефалоспоринам 3-го поколения (8,3–16,5%). Активность бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС) была обнаружена у 28,1% изолятов V. parahaemolyticus . Половина ESBL-положительных штаммов V. parahaemolyticus содержала bla CTX-M1 . Мы обнаружили связь между наличием остатков и количеством резистентностей для NTS (p = 0.075) и Vibrio spp. изолятов (p = 0,093) из того же образца. Эти данные свидетельствуют о том, что наличие остатков может способствовать отбору AMR в патогенах пищевого происхождения у креветок. Властям следует усилить политику, направленную на ограничение ненадлежащего использования противомикробных препаратов при выращивании креветок, и усилить мониторинг остатков противомикробных препаратов и патогенов пищевого происхождения в розничной торговле во Вьетнаме.

Ключевые слова

Креветки

Нетифоидные Salmonella

Vibrio

Остатки

Устойчивость к противомикробным препаратам

Вьетнам

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Авторы.Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Высокое генетическое сходство между нетифоидной сальмонеллой, выделенной из парных образцов крови и стула детей в Демократической Республике Конго

6. Крамп Дж. А., Хейдерман Р. С.. Взгляд на инвазивную болезнь сальмонеллы в Африке. Clin Infect Dis.

2015; 61: S235 – S240. https://doi.org/10.1093/cid/civ709 PMID: 26449937

7. Кингсли Р.А., Мсефула К.Л., Томсон Н.Р., Кариуки С., Холт К.Э., Гордон М.А. и др.Эпидемия множественных лекарств

Устойчивые Salmonella Typhimurium, вызывающие инвазивные заболевания в странах Африки к югу от Сахары, имеют особый генотип

. Genome Res. 2009; 19: 2279–2287. https://doi.org/10.1101/gr.091017.109 PMID: 19

6

8. Окоро С.К., Кингсли Р.А., Коннор Т.Р., Харрис С.Р., Парри С.М., Аль-Машхадани М.Н. и др. Внутриконтинентальное распространение

инвазивных возбудителей болезней человека Salmonella Typhimurium pathovariants в Африке к югу от Сахары. Нат Жене.

2012; 44: 1215–1221. https: // doi.org / 10.1038 / ng.2423 PMID: 23023330

9. Физи Н.А., Хэдфилд Дж., Кедди К.Х., Даллман Т.Дж., Джейкобс Дж., Дэн Х и др. Определенные линии происхождения Salmonella Enteritidis

, связанные с энтероколитом в странах с высоким уровнем дохода и инвазивными заболеваниями в группе с низким уровнем доходов —

единиц. Нат Жене. 2016; 48: 1211–1217. https://doi.org/10.1038/ng.3644 PMID: 27548315

10. Окоро С.К., Барквист Л., Коннор Т.Р., Харрис С.Р., Клэр С., Стивенс М.П. и др. Сигнатуры адаптации в

популяциях человека, инвазивного Salmonella Typhimurium ST313 из Африки к югу от Сахары.PLoS Negl

Trop Dis. 2015; 9. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0003611 PMID: 25803844

11. Гал-Мор О., Бойл Е.С., Грассл Г.А. Один и тот же вид, разные болезни: как и почему тифозные серовары Salmonella enterica отличаются от других. Front Microbiol. 2014; 5: 1–10. https://doi.org/10.3389/

fmicb.2014.00001 PMID: 24478763

12. Кариуки С., Ревати Г., Кариуки Н., Кииру Дж., Мвитурия Дж., Муйоди Дж. и др. Инвазивные инфекции с множественной лекарственной устойчивостью, не

, тифоидные инфекции Salmonella в Африке: зоонозная или антропонозная передача? J Med Microbiol.

2006; 55: 585–591. https://doi.org/10.1099/jmm.0.46375-0 PMID: 16585646

13. Физи Н.А., Дуган Г., Кингсли Р.А., Хейдерман Р.С., Гордон М.А. Инвазивная нетифоидная сальмонелла

Болезнь: новое и забытое тропическое заболевание в Африке. Ланцет. 2012; 379: 2489–2499. https: //

doi.org/10.1016/S0140-6736(11)61752-2 PMID: 22587967

14. Tack B, Phoba MF, Van Puyvelde S, Kalonji LM, Hardy L, Barbe

´B, и другие. Salmonella Typhi из крови

культур в демократической республике конго: 10-летнее наблюдение.Clin Infect Dis. 2019; 68:

S130 – S137. https://doi.org/10.1093/cid/ciy1116 PMID: 30845337

15. Тэк Б, Фоба М., Барбе

Б, Калонджи Л., Харди Л., Ван Пуйвельде С. и др. Рост числа нетифоидных инфекций кровотока Salmo-

nella в Демократической Республике Конго (2015–2017 гг.): Появление O5-

отрицательных Salmonella Typhimurium и тревожные показатели устойчивости. PLoS Negl Trop Dis. 2020; 14:

e0008121. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0008121 PMID: 32240161

16. Lunguya O, Lejon V, Phoba MF, Bertrand S, Vanhoof R, Verhaegen J, et al. Salmonella Typhi в Демократической Республике Конго

: восприимчивость к фторхинолону снижается и растет. PLoS Negl

Trop Dis. 2012; 6: 3–8. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0001921 PMID: 23166855

17. Гримонт П., Вейл Ф. X. Антигенные формулы сервоваров Salmonella. ВОЗ Collab Cent Ref Res Sal-

monella. 2007; 1–167. Доступно: http: // www.pasteur.fr/ip/portal/action/WebdriveActionEvent/oid/01s-

000036-089% 5Cnpapers2: // Publication / uuid / CA3447A0-61BF-4D62-9181-C9BA78AF0312

18. Wuyts V, Mattheus W, De Laminne De Bex G, Wildemauwe C, Roosens NHC, Marchal K и др. MLVA

как инструмент общественного здравоохранения для эпиднадзора за Salmonella Typhimurium человека: проспективное исследование в Бельгии

и оценка стабильности локусов MLVA. PLoS One. 2013; 8. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0084055

PMID: 24391880

19.Бертран С., Де Ламин Де Бекс Дж., Вильдемау С., Лунгуя О, Фоба М.Ф., Лей Б. и др. Мультилокусный вариант

Инструменты для типирования тандемных повторов (MLVA) с числом возможных повторов (MLVA) улучшили эпиднадзор за Salmonella Enteritidis: 6-летнее ретроспективное исследование

. PLoS One. 2015; 10: 1–13. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0117950

PMID: 25693200

20. Ли Х, Хандакер Б., Вайсокер А., Феннелл Т., Руан Дж., Гомер Н. и др. Формат последовательного выравнивания / карты

и SAMtools. Биоинформатика.2009; 25: 2078–2079. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btp352

PMID: 19505943

21. Арндт Д., Грант Дж. Р., Марку А., Саджед Т., Пон А., Лян И. и др. PHASTER: улучшенная и быстрая версия инструмента поиска фагов

PHAST. Nucleic Acids Res. 2016; 44: W16 – W21. https://doi.org/10.1093/nar/

gkw387 PMID: 27141966

22. Чжоу Ю., Лян И., Линч К. Х., Деннис Дж. Дж., Вишарт Д. С.. PHAST: инструмент быстрого поиска фагов. Nucleic Acids

Res. 2011; 39: 347–352.https://doi.org/10.1093/nar/gkq749 PMID: 20817927

23. Краучер Н.Дж., Пейдж А.Дж., Коннор Т.Р., Делани А.Дж., Кин Дж.А., Бентли С.Д. и др. Быстрый филогенетический анализ —

sis больших выборок рекомбинантных полных геномных последовательностей бактерий с использованием Gubbins. Nucleic Acids

Res. 2015; 43: e15. https://doi.org/10.1093/nar/gku1196 PMID: 25414349

24. Пейдж А.Дж., Тейлор Б., Делани А.Дж., Соарес Дж., Зееманн Т., Кин Дж.А. и др. SNP-сайты: быстрое и эффективное извлечение

SNP из мульти-FASTA выравниваний.Геномика микробов. 2016; 2: e000056. https://doi.org/10.

1099 / mgen.0.000056 PMID: 28348851

PLOS ЗАБЫТЫЕ ТРОПИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Высокое генетическое сходство между парными НТС крови и стула у детей в ДР Конго

PLOS Запущенные тропические болезни | https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0008377 2 июля 2020 г. 13/15

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
    браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

генов | Бесплатный полнотекстовый | Влияние топологии ДНК на наблюдаемые скорости образования R-петли и расщепления цепи ДНК с помощью CRISPR Cas12a

1.Введение

CRISPR (сгруппированные регулярно перемежающиеся короткие палиндромные повторы) -Cas (связанные с CRISPR) системы эволюционировали для защиты микробов от бактериофагов и были классифицированы на различные типы на основе их генов cas [1,2]. Благодаря своей способности к программированию ДНК на основе РНК эффекторные нуклеазы Cas9 типа II получили широкое распространение в качестве инструментов для редактирования генов и не только [3]. Совсем недавно было показано, что эффекторы Cas12a типа V (ранее известные как Cpf1) также активны для редактирования генов [4,5].Уникальные свойства паралогов Cas12a означают, что для многих приложений они могут стать предпочтительным ферментом для редактирования генов. Несмотря на кристалл высокого разрешения и структуры электронной микроскопии (ЭМ), а также дальнейший быстрый прогресс, наши знания о Cas12a рудиментарны [6]. Здесь мы стремились понять нуклеазный механизм бактерии Lachnospiraceae ND2006 Cas12a (LbCas12a) путем изучения кинетики расщепления ДНК и влияния топологии ДНК на наблюдаемые скорости. Активация активности нуклеазы Cas12a требует образования R-петли между РНК CRISPR ( crRNA) и последовательности протоспейсеров ДНК [7,8,9,10].Бинарный комплекс Cas12a-crRNA сначала связывает ДНК посредством взаимодействия между T-богатым смежным мотивом протоспейсера (PAM, 5′-TTTV-3 ‘, где V = A / C / G) [11], и гибким карманом, образованным клин (WED), REC1 и PAM-взаимодействующие (PI) домены [7,11] (Рисунок 1). Искажение PAM приводит к АТФ-независимому разделению стоек, и целевая цепь ДНК (TS) образует гетеродуплекс с предварительно структурированным 3’-концом спейсерной последовательности crRNA («затравка») [4,7,8,12], смещая нецелевой нить (NTS). Затем R-петля из 20 п.н. размножается путем распаковки дцДНК и гибридизации РНК псевдо А-формы, запуская расщепление ДНК с некоторой вариабельностью в точных сайтах разрезания [4,13].Как Cas12a генерирует разрыв дцДНК, было предметом некоторых дискуссий, с недавними открытиями, которые помогают прояснить наше понимание механизма. Для Cas9 существуют отдельные, классифицируемые нуклеазные домены, RuvC и HNH, которые нацелены на NTS и TS, соответственно. [14,15,16]. Домен HNH расщепляет ДНК быстрее, чем RuvC, но было высказано предположение, что конформационная активация домена HNH контролирует общее время расщепления ДНК [17,18]. Поддающийся классификации домен RuvC присутствует в Cas12a, но второй домен нуклеазы не был идентифицирован только на основании предсказания последовательности / структуры [4,19].Неклассифицированный домен (Nuc, рис. 1) был предложен в качестве второй нуклеазы на основании того, что мутации вызывают разрыв ДНК [10]. Поскольку мутации RuvC предотвращают любое расщепление [10], был предложен механизм упорядоченного расщепления цепи, при котором сначала должен действовать RuvC, и только затем Nuc может выполнять расщепление второй цепи. Другие группы утверждали, что в Nuc отсутствуют идентифицируемые каталитические остатки, и продемонстрировали, что эквивалентные мутанты по-прежнему вызывают расщепление дцДНК [7]. Альтернативное предположение состоит в том, что Nuc регулирует доступ к активному сайту RuvC, который разрезает обе цепи [6,8].Структуры родственного фермента типа V Cas12b [20,21] также больше соответствовали Nuc, действующему в некаталитической роли. Закрытие долей Cas12a перемещает домены PI, REC1 и REC2, обнажая нуклеазу RuvC и сначала направляя перемещенные NTS. в сторону RuvC [6,8,9,22,23], хотя ни одна из структур не показывала, что ДНК взаимодействует с активным сайтом. Stella et al. недавно идентифицировали серию контрольных точек конформации, которые связывают распространение R-петли с активацией нуклеазы [8]: во-первых, петля, соединяющая доли REC1 и REC2 («линкер», рис. 1), взаимодействует с 5-7 нуклеотидами crRNA в качестве Формы R-петли; во-вторых, петля («крышка», рис. 1) изменяет конформацию, разрывает контакты с каталитическими боковыми цепями нуклеазы RuvC и взаимодействует с 8–11 нуклеотидами крРНК; и в-третьих, спираль в доле REC1 («палец», Рис. 1) перемещается, чтобы взаимодействовать с 15-17 нуклеотидами crRNA.Потребность в более чем 17 п.н. гибрида для активации расщепления была измерена в другом месте [5,7,24]. После активации экспонированная нуклеаза теперь может связывать оцДНК, причем NTS находится наиболее близко (рис. 1). Соответственно, несколько исследований продемонстрировали разницу в кинетике расщепления NTS и TS. Jeon et al. (2018) использовали флуоресценцию одной молекулы для идентификации различных состояний передачи энергии резонанса флуоресценции (FRET), которые следовали последовательному порядку во время расщепления ДНК Acidaminococcus sp.Cas12a (AsCas12a) [25]. Используя олигодуплексы из 51 п.н., предварительно разорванные либо в NTS, либо в TS, они приписали состояния FRET событиям расщепления NTS или TS. Профили перехода FRET затем соответствовали расщеплению NTS перед расщеплением TS. Но время жизни состояний оказалось примерно одинаковым (36 с и 58 с при 37 ° C). В обширном кинетическом исследовании Strohkendl et al. с последующим расщеплением NTS и TS с помощью AsCas12a в отдельных реакциях путем индивидуального радиоактивного мечения каждой цепи олигодуплекса 57 п.н. [26]. Они определили максимальные константы скорости расщепления, равные 0.05 с -1 и 0,005 с -1 для NTS и TS, соответственно (при 25 ° C), что соответствует расщеплению NTS, предшествующему расщеплению TS. Stella et al. [8] измерили скорость расщепления отдельных цепей с использованием меченых олигодуплексов. Скорость расщепления NTS ~ 0,007 с. -1 (при 37 ° C) измеряли с использованием частично двухцепочечного дуплекса, где спейсер NTS составлял 24 нт, а спейсер TS составлял 20 нт. Скорость расщепления TS ~ 0,0009 с. -1 (при 37 ° C) была измерена с использованием частично двухцепочечного дуплекса, где спейсер TS составлял 20 нт, а спейсер TS составлял только 14 нуклеотидов.Опять же, данные согласуются с тем, что NTS расщепляется перед TS. Тем не менее, мы отмечаем, что в других исследованиях использовалась меченая ДНК для отслеживания расщепления NTS и TS, но не наблюдали измеримых различий во внешнем виде продукта. Активированная открытая нуклеаза может принимать NTS с большей готовностью из-за своей ориентации и местоположения, при этом TS только медленнее входит после конформационный переход (т.е. нет строгого последовательного порядка как такового) [8]. Эта идея согласуется с наблюдением in trans-расщепления сторонней неспецифической ssDNA, которое катализируется с помощью Cas12a при распознавании цепи TS [22,23].Альтернативно, одиночная нуклеаза RuvC-Nuc может последовательно переходить между NTS и TS строго упорядоченным образом, но другая ДНК может получить доступ к сайту в любой момент. Во многих исследованиях эффекторов CRISPR Cas использовались короткие олигодуплексы в качестве удобных субстратов для мониторинга взаимодействий нуклеиновых кислот и нуклеазной активности. Однако, используя анализ одномолекулярного магнитного пинцета (МТ), мы показали с каскадом типа II Cas9 и типа I, что на топологически ограниченной линейной ДНК отрицательная суперспирализация ускоряет скорость образования R-петель [27].Из-за низкого / нулевого отрицательного крутящего момента на неограниченной линейной ДНК образование R-петли может стать ограничивающим скорость по сравнению с другими этапами. Кроме того, короткие олигодуплексы могут дестабилизироваться во время образования R-петли, что приводит к изнашиванию концов ДНК. Это может способствовать формированию R-петли в отсутствие топологии, но может не имитировать ситуацию в геномном контексте, когда протоспейсеры находятся далеко от свободных концов.Чтобы устранить зависимость от крутящего момента образования R-петли и расщепления ДНК LbCas12a, мы сначала использовали ранее описанный анализ MT [27] для отслеживания образования R-петли с помощью LbCas12a в режиме реального времени.Данные показывают, что LbCas12a, как и ожидалось, зависит от крутящего момента, но менее стабильна по крутящему моменту, чем Cas9 или Cascade. Сравнивая кинетику расщепления на плазмидной, разорванной и линейной ДНК, мы показываем, что константы скорости микроскопического расщепления ДНК для первого события расщепления более чем в 15 раз выше, чем второго, и что наблюдаемое расщепление разорванной и линейной ДНК происходило медленнее на 100%. как минимум в 50 раз по сравнению с ДНК с отрицательной суперспирализацией. Это можно объяснить тем, что образование R-петли ограничивает скорость неограниченной линейной ДНК по сравнению с расщеплением.Помечая цепи TS и NTS линейной ДНК длиной плазмиды и сравнивая данные с моделированием с использованием измеренных констант скорости первой и второй цепей, мы могли показать, что более высокая скорость расщепления обусловлена ​​расщеплением NTS. Однако мы не могли отличить строгие последовательные модели от случайных только на основе кинетики. Мы предполагаем, что будущие исследования Cas12a (и др. Эффекторных нуклеаз CRISPR-Cas) всегда должны учитывать влияние кинетики образования R-петли на наблюдаемые скорости последующих событий, включая движения доменов и события расщепления цепи.

2. Материалы и методы

2.1. Белок

Saccharomyces cerevisiae Убиквитин-подобная специфическая протеаза 1 (SUMO-протеаза ULP1) очищали с использованием pFGET19_Ulp1 и опубликованного протокола [28]. Синтетический ген LbCas12a, кодонно-оптимизированный для экспрессии Escherichia coli, был предоставлен IDT и клонирован в pE-SUMO (Kan) (LifeSensors Inc, Малверн, Пенсильвания, США) с использованием сборки ДНК NEBuilder ® HiFi (New England Biolabs). , Ипсвич, Массачусетс, США). Для экспрессии белка E. coli Tuner (DE3) трансформировали pE-SUMO (Kan) -Cas12a.После роста в течение ночи при 37 ° C на LB-агаре (канамицин, 50 мкг / мл) использовали одну колонию для инокуляции 5 мл LB (канамицин, 50 мкг / мл). После роста в течение ночи при 37 ° C 5 мл культуры использовали для инокуляции 500 мл LB (канамицин, 50 мкг / мл), и клетки выращивали в колбе на 2,5 л при 37 ° C и встряхивании 250 об / мин. При OD 600 ~ 0,6–0,7 добавляли изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид до 1 мМ, и клетки продолжали в течение ночи при 16 ° C и встряхивании 250 об / мин. Собирали

клеток, ресуспендировали в 25 мл буфера A [50 мМ Tris-Cl (pH 8.0), 500 мМ NaCl, 5 мМ MgCl 2 , 0,5 мМ ЭДТА, 1 мМ β-меркаптоэтанол и таблетки ингибитора протеазы без ЭДТА в соответствии с инструкциями производителя (Roche, Welwyn Garden City, UK)] и лизировали ультразвуком. Экстракт клеток осветляли центрифугированием при 100 736 g в течение 40 мин. Супернатант диализовали в течение> 1 часа при 4 ° C против буфера B [50 мМ трис-Cl (pH 8,0), 500 мМ NaCl, 1 мМ β-меркаптоэтанол, 30 мМ имидазол] с использованием диализных трубок Snake Skin с отсечкой 10000 Да . Диализованный образец был 0.45 мкм фильтровали и загружали в колонку HisTrap объемом 5 мл (GE Healthcare UK Ltd, Литтл-Чалфонт, Великобритания), уравновешенную буфером B. Связанные белки элюировали линейным градиентом имидазола в буфере B (30–500 мМ, 100 мл). ). Фракции, содержащие Cas12a, были объединены и диализованы в течение 1 часа при 4 ° C против двух замен буфера C [50 мМ трис-Cl (pH 8,0), 200 мМ NaCl, 1 мМ β-меркаптоэтанол] с использованием диализа с отсечкой 10000 Да. трубка. Ulp1 добавляли в диализную трубку и инкубировали в течение ночи при 4 ° C в свежем буфере C.

NaCl и имидазол добавляли до 500 мМ и 30 мМ, соответственно, и диализованный образец 0,45 мкм фильтровали и загружали в 5-мл колонку HisTrap (GE Healthcare UK Ltd), уравновешенную в буфере B. собирали и протеазу Sumo-tag и ULP1 элюировали отдельно с использованием буфера B с добавлением 500 мМ имидазола. Cas12a концентрировали и уравновешивали в буфере C с использованием центробежных фильтров с отсечкой 50 кДа (Millipore, MA, США). Для хранения при -20 ° C добавляли глицерин до 50% (об. / Об.).

2.2. crRNA и сборка рибонуклеопротеинового комплекса

crRNA получали транскрипцией in vitro. Олигодезоксирибонуклеотиды 5′-GAAATTAATACGACTCACTATCGGG-3 ‘и 5′-AGCTCGAATTGAAATTCTAAACGCATCTACACTTAGTAGTAGAAATTCCCTATAGTGAGTCGTATTAATTTC-3’ (Eurofins genomics) с последующим медленным нагреванием при температуре 95 ° C при температуре 95 ° C и последующем нагревании в течение 50 минут при температуре 95 ° C, медленно нагревали в течение 50 минут при температуре 95 ° C, при температуре 50 ° C . Этот олигодуплекс затем использовали в наборе для синтеза РНК с высоким выходом HiScribe T7 (New England Biolabs) в соответствии с протоколом производителя.Образцы подвергали необязательной обработке ДНКазой I и очищали крРНК с использованием RNA Clean & Concentrator (Zymo Research, Irvine, CA, USA). Концентрации РНК определяли по УФ-поглощению при 260 нм. Для сборки рибонуклеопротеинового комплекса 500 нМ Cas12a и 500 нМ кРНК инкубировали в буфере SB [10 мМ Трис (pH 7,5), 100 мМ NaCl, 1 ЭДТА, 0,1 мМ DTT, 5 мкг / мл БСА] с ингибитором РНКазы (1U / мкл SUPERase в, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) в течение 1 часа при 37 ° C, и сразу же использовали собранный комплекс.

2.3. ДНК-субстраты

. Для анализа МТ плазмиду pSP1 использовали для приготовления линейного ДНК-субстрата, меченного биотином и дигоксигенином (см. Основной текст), как описано ранее [27,29]. Для суперспиральной ДНК, используемой в анализах расщепления, E. coli Top10 (Invitrogen) или XL10-Gold (Stratagene, Сан-Диего, Калифорния, США) трансформировали pSP1 [27], выращенной в минимальной среде M9 с добавлением 37 МБк / л. [ 3 H-метил] тимидин, и ДНК экстрагировали с использованием коммерческих протоколов (Qiagen, Hilden, Германия) или центрифугированием в градиенте плотности в CsCl-бромистом этидии [30].Субстраты ДНК Open Circle или LIN1 получали путем инкубации 3 H-меченного pSP1 с 0,5 ед. / Мкл BspQI или Nt.BspQI в NEBuffer 3.1 (New England Biolabs) в течение 1 часа при 50 ° C. ДНК очищали экстракцией фенолом / хлороформом и хлороформом с последующим осаждением этанолом. Концентрации ДНК определяли по УФ-поглощению при 260 нм, предполагая, что оптическая плотность 1 соответствует 50 мкг / мл ДНК и молекулярная масса 6,6 × 10 5 Да / кбп. На линейном субстрате последовательность PAM составляет 258 и 1853 п.н. от свободных концов ДНК.

Для экспериментов по специфичности цепи была использована ПЦР для получения линейного фрагмента pSP1 длиной 2118 п.н. с прямым праймером 5′-GCGTAAGTCTCGAGAACTAGTTCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACT-3 ‘и обратным праймером 5′-GCGTAAGTGCGGCCGCTTCGTTCCAGAAGAG. Чтобы пометить TS или NTS, прямой или обратный праймер, соответственно, сначала был 5’-мечен 32 P с использованием Т4-полинуклеотидкиназы. Реакции ПЦР очищали с использованием набора для очистки QIAquick PCR (Qiagen), и концентрации ДНК определяли, как указано выше.В качестве маркера коммерческую лестницу ДНК размером 1 т.п.н. (New England Biolabs) метили 32 P с использованием Т4-полинуклеотидкиназы.

2.4. Анализ с помощью магнитного пинцета

Измерения с помощью магнитного пинцета были выполнены с использованием коммерческого микроскопа PicoTwist (Fleurieux sur L’Arbresle, Франция), оснащенного камерой Jai CV-A10 GE (получение изображений с частотой 60 Гц) [31]. Молекулы ДНК были привязаны к парамагнитным шарикам MyOne размером 1 мкм (Invitrogen) и закреплены в проточных ячейках, как описано ранее [27].Подходящую топологически ограниченную ДНК идентифицировали по кривым вращения и эталонному нулю вращения (Rot 0 ), установленному на кривой вращения при 0,3 пН. Реакции R-петли анализировали в буфере SB при 25 ° C, используя 5-нМ LbCas12a-crRNA. Сдвиг Rot 0 при образовании R-петли оценивали путем сравнения наклона кривых вращения, когда R-петля была захвачена отрицательным крутящим моментом, с эквивалентными наклонами в отсутствие фермента. Каждую кривую в контрольном наборе из 10 кривых вращения, собранных в отсутствие фермента, сравнивали с каждой кривой вращения, когда R-петля была захвачена в присутствии фермента (всего 22), с использованием метода наименьших квадратов для итеративного подбора сопоставленные наборы данных при -4.От 5 до –6,0 оборотов на параллельные прямые. 220 параметризованных линейных аппроксимаций, которые использовались для оценки сдвига в кривых вращения, и локальное среднее значение было получено для каждого события R-петли. Глобальное среднее значение сдвигов Rot 0 было впоследствии получено путем параметризации распределения локальных средних значений до функции Гаусса с помощью оценки максимального правдоподобия. Тот же принцип был применен для анализа сдвига из-за R-петли, которая остается в ловушке при положительном крутящем моменте. В этом случае каждый след в контрольном наборе из 18 кривых вращения, собранных в присутствии фермента, где R-петля уже спонтанно диссоциировала при более низком положительном вращающем моменте, сравнивали с каждой из 2 кривых, в которых R-петля оставалась связанной при + 3.От 0 до +5,0 оборотов, и глобальное среднее значение сдвига Rot 0 было получено из 36 подгонок без предположения о статистическом распределении данных. Значения крутящего момента были рассчитаны с использованием программного обеспечения, описанного в [27]. Ошибки среднего времени образования и диссоциации R-петли были рассчитаны как стандартная ошибка экспоненциального распределения путем деления среднего времени реакции на квадратный корень из числа событий [29].

2,5. Анализы расщепления ДНК

Реакции расщепления ДНК in vitro содержали 3 нМ ДНК-субстрата и 50 нМ LbCas12a-crRNA в буфере RB [10 мМ Трис (pH 7.5), 100 мМ NaCl, 10 мМ MgCl 2 , 0,1 мМ DTT, 5 мкг / мл BSA] при 25 ° C. Реакции инициировали добавлением Cas12a-crRNA. Для электрофореза в нативном 1,5% (мас. / Об.) Агарозном геле в 1 × буфере ТАЕ реакции гасили в моменты времени, указанные 0,5 объемами STEB [0,1 М Трис (pH 7,5), 0,2 М ЭДТА, 40% (мас. / Об.) v) сахароза, 0,4 мг / мл бромфенолового синего] и нагревали в течение 10 мин при 80 ° C. Процент ДНК в каждой полосе на полосу определяли сцинтилляционным счетом [30]. Обратите внимание, что меньший продукт расщепления LIN1 четко не разделялся на геле.Для щелочного денатурирующего электрофореза в 2% (мас. / Об.) Агарозном геле в 50 мМ NaOH, 1 мМ ЭДТА реакции гасили в моменты времени, указанные 0,5 объемами щелочного буфера [300 мМ NaOH, 6 мМ ЭДТА, 18% (мас. v) фиколл 400, 0,1% (мас. / об.) бромкрезолового зеленого и 0,1% (мас. / об.) ксилолцианола] и нагревали в течение 10 мин при 80 ° C. После электрофореза гели нейтрализовали в течение 1 часа в 500 мМ Трис-HCl (pH 8), прессовали в течение одного часа, сушили в вакууме в течение одного часа и анализировали 16-битное денситометрическое сканирование люминофорного экрана с использованием программного обеспечения для одномерного гелевого анализа. ImageQuant (GE Healthcare).Подгонка ДНК и моделирование использовали численное интегрирование в Berkeley Madonna (www.berkeleymadonna.com). Для подгонок средние значения и ошибки были рассчитаны на основе значений, полученных из отдельных наборов данных.

4. Обсуждение

Мы измерили образование R-петли для LbCas12a (рис. 1), используя тесты MT, ранее применявшиеся к Cas9 и Cascade (рис. 2) [27]. Наши данные согласуются с R-петлей размером ~ 20 п.н., наблюдаемой в кристаллических структурах (хотя поворотные сдвиги, измеренные на рис. 2D, E, являются косвенным измерением, которое может быть изменено путем наматывания / изгибания ДНК [27]).Данные наиболее похожи на данные, наблюдаемые для Cas9 типа II, который был значительно менее стабильным по крутящему моменту, чем Cascade типа I. Как кривые вращения, так и кинетические данные (рис. 2D, G) показывают, что Cas12a более чувствителен к крутящему моменту, чем Cas9, со спонтанным образованием и диссоциацией R-петли при низких значениях крутящего момента. Для Streptococcus thermophilus DGCC7710 CRISPR3 Cas9 расчетное время перехода для диссоциации R-петли при нулевом крутящем моменте составляло ~ 130 с [27], что позволяет предположить, что он более чем в 10 раз более стабилен, чем LbCas12a (Таблица 1).Нестабильность крутящего момента Cas12a может быть преимуществом в предотвращении нецелевых эффектов, поскольку несовпадения могут иметь больший дестабилизирующий эффект. Исследование эффектов несоответствия было предпринято для линейных ДНК-мишеней in vitro Strohkendl et al. [26], а также другими [4,7,24]. Было бы интересно определить, влияет ли суперспирализация ДНК на эффекты несовпадений. Мы наблюдали поразительную разницу в очевидных скоростях расщепления ДНК на отрицательно свернутой плазмидной ДНК по сравнению с топологически неограниченными субстратами (рис. 3).Поскольку отрицательная суперспирализация ДНК способствует образованию R-петли (рис. 2), это можно легко объяснить тем, что скорость расщепления ДНК ограничена образованием R-петли в отсутствие отрицательного момента; R-петли образуются в течение секунды на отрицательно свернутой ДНК, но могут занимать от десятков до сотен секунд на линейной или разорванной ДНК. Во многих предыдущих исследованиях систем типа V использовались линейные ДНК-субстраты. Необходимо соблюдать осторожность при анализе последующих событий (например, кинетики расщепления), чтобы убедиться, что учитывается влияние скорости образования R-петли.На скорость также может влиять положение протоспейсера относительно концов ДНК; близость к концу может способствовать более быстрому формированию R-петли из-за захвата свободной оцДНК, образующейся в результате термического разрушения, и / или из-за изменения термодинамики разделения цепей. В соответствии с другими исследованиями [8,26], мы наблюдали более чем 15-кратная разница в скорости расщепления NTS по сравнению с TS (Рисунок 3 и Рисунок 4, Таблица 2). Из-за различий в скоростях расщепления первой и второй цепей трудно различить строго упорядоченный механизм и случайный механизм, основанный на нашей кинетике.Ограничение подхода на рисунке 4 заключается в том, что меченая оцДНК может представлять несколько видов на пути реакции (рисунок 4B). Потенциальным решением является субстрат, на котором могут быть разделены промежуточные соединения TS и NTS. Одним из способов достижения этого может быть самокомплементарный олигонуклеотидный субстрат шпильки с меткой для анализа (например, флуорофором) внутри шпильки оцДНК и разделение видов ДНК на денатурирующем геле. Для ступенчатого разреза, производимого Cas12a, это позволит разделить меченый субстрат, как промежуточные соединения, так и продукт в виде фрагментов различной длины за одну реакцию.Однако из-за наблюдаемой здесь 15-кратной разницы в скоростях расщепления цепей, усугубляемой медленной скоростью образования R-петли на релаксированной ДНК, необходимо быть уверенным в различении промежуточных промежуточных звеньев с разрывом 0% TS (для упорядоченной модели NTS → TS ) от ~ 0,2% максимального TS промежуточного звена с разрывами (для случайной модели). Даже если бы скорость образования R-петли могла быть увеличена, разница в ожидаемых промежуточных видах TS все равно была бы только 0% и 2% соответственно. Более медленная наблюдаемая константа скорости расщепления TS может быть связана с медленным конформационным переходом, который требуется задействовать TS на активном сайте RuvC [7,8].PAM-дистальный сайт расщепления TS удален (> 40 Å) от RuvC в структурах Cas12a (Рис. 1). Следовательно, необходимо значительное перемещение RuvC-Nuc и / или ДНК-РНК. Один из вариантов состоит в том, что область TS должна раскручиваться после расщепления NTS, чтобы открыть оцДНК для расщепления, и она перемещается в активный сайт («наматывание ДНК»). Stella et al. предполагают, что для облегчения этого R-петля может частично раскручиваться [8]. Альтернативно, домены RuvC-Nuc могут перемещаться к дистальному сайту расщепления TS (т.е.д., закрывая доли нуклеазы и Rec). Этап изменения конформации после расщепления NTS не был включен в рассмотрение наших кинетических моделей. Без возможности измерения промежуточных видов добавление дополнительных параметров к модели не дало бы разумных подобранных значений. Альтернативные подходы, такие как FRET или определение структуры (например, [8,24]), потребуются, чтобы выявить, какие движения в белке и ДНК / РНК необходимы.

Анализ последовательности генома SARS-CoV-2 выявил особенности, важные для разработки вакцины

  • 1.

    Отчет о ситуации по коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) –140. https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/situation-reports/20200608-covid-19-sitrep-140.pdf?sfvrsn=2f310900_2 (Всемирная организация здравоохранения, Женева, 2020 г.).

  • 2.

    Coleman, J. R. et al. Аттенуация вируса за счет изменений смещения пар кодонов в масштабе генома. Наука 320 , 1784–1787 (2008).

    ADS
    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 3.

    Коулман, Дж. Р., Папамихаил, Д., Яно, М., Гарсия-Суарес, М. Д. М. и Пирофски, Л. А. Разработанное снижение патогенности Streptococcus pneumoniae за счет синтетических изменений в смещении пар кодонов фактора вирулентности. J. Infect. Дис. 203 , 1264–1273 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 4.

    Athey, J. et al. Новый и обновленный ресурс для таблиц использования кодонов. BMC Bioinform. 18 , 391 (2017).

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 5.

    Alexaki, A. et al. Таблицы кодонов и пар кодонов (CoCoPUT): облегчение анализа генетических вариаций и дизайна рекомбинантных генов. J. Mol. Биол. 431 , 2434–2441 (2019).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 6.

    Комар, А. А. Инь и Ян использования кодонов. Hum. Мол. Genet. 25 , R77 – R85 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 7.

    Kunec, D. & Osterrieder, N. Смещение пар кодонов является прямым следствием смещения динуклеотидов. Cell Rep. 14 , 55–67 (2016).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 8.

    Захарчук, А.Н. и др. Иммуногенность рецептор-связывающего домена шипового белка коронавируса SARS у мышей: значение субъединичной вакцины. Vaccine 25 , 136–143 (2007).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 9.

    Takata, M.A. et al. Подавление динуклеотидов CG обеспечивает противовирусную защиту, направленную на несамостоятельную РНК. Nature 550 , 124–127 (2017).

    ADS
    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 10.

    Lan, J. et al. Подбор субъединичного иммунитета вакцины с помощью комбинаций адъювантов и путей доставки с использованием рецептор-связывающего домена ближневосточного респираторного коронавируса (БВРС-КоВ) в качестве антигена. PLoS ONE 9 , e112602 (2014).

    ADS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 11.

    Chen, F. et al. Диссимиляция систематической ошибки использования синонимичных кодонов при совместной эволюции вирус-хозяин из-за трансляционного отбора. Нат. Ecol. Evol. 4 , 589–600 (2020).

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 12.

    Холкомб, Д., Алексаки, А., Катнени, У. и Кимчи-Сарфати, К. База данных использования кодонов Казуса, CoCoPUT и ценность актуальной статистики использования кодонов. Заражение. Genet. Evol. 73 , 266–268 (2019).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 13.

    Рахман С.У., Яо, X., Ли, X., Чен, Д. и Тао, С. Анализ предвзятости использования кодонов вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки и его адаптации к хозяевам. Заражение. Genet. Evol. 58 , 1–16 (2018).

    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 14.

    Лим, Ю. X., Нг, Ю. Л., Там, Дж. П. и Лю, Д. X. Коронавирусы человека: обзор взаимодействий вирус-хозяин. Болезни 4 , 26 (2016).

    PubMed Central
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 15.

    Guo, Y. R. et al. Происхождение, передача и клинические методы лечения вспышки коронавирусного заболевания 2019 (COVID-19) — обновленная информация о статусе. Mil. Med. Res. 7 , 11 (2020).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google ученый

  • 16.

    Plant, E. P. et al. Трехстворчатый псевдоузел мРНК в сигнале сдвига рамки считывания коронавируса SARS. PLoS Biol. 3 , e172 (2005).

    PubMed
    PubMed Central
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 17.

    Белузар, С., Миллет, Дж. К., Лиситра, Б. Н. и Уиттакер, Г.R. Механизмы проникновения в клетки коронавируса, опосредованные вирусным спайковым белком. Вирусы 4 , 1011–1033 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 18.

    Jia, H.P. et al. Экспрессия рецептора ACE2 и тяжелая форма коронавирусной инфекции острого респираторного синдрома зависят от дифференциации эпителия дыхательных путей человека. J. Virol. 79 , 14614–14621 (2005).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 19.

    Lu, R. et al. Геномная характеристика и эпидемиология нового коронавируса 2019 г .: влияние на происхождение вируса и связывание с рецептором. Ланцет 395 , 565–574 (2020).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 20.

    Рух, Т. Р. и Мачамер, К. Э. Белок коронавируса E: сборка и не только. Вирусы 4 , 363–382 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 21.

    Neuman, B. W. et al. Структурный анализ белка М в сборке и морфологии коронавируса. J. Struct. Биол. 174 , 11–22 (2011).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 22.

    Risco, C., Anton, I.M, Enjuanes, L. & Carrascosa, J.L. Коронавирус трансмиссивного гастроэнтерита содержит сферическую сердцевинную оболочку, состоящую из белков M и N. J. Virol. 70 , 4773–4777 (1996).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 23.

    McBride, R., van Zyl, M. & Fielding, B.C. Нуклеокапсид коронавируса представляет собой многофункциональный белок. Вирусы 6 , 2991–3018 (2014).

    PubMed
    PubMed Central
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 24.

    Фер, А. Р. и Перлман, С. Коронавирусы: обзор их репликации и патогенеза. Methods Mol. Биол. 1282 , 1–23 (2015).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 25.

    Zhang, T., Wu, Q. & Zhang, Z. Вероятное происхождение SARS-CoV-2, связанного со вспышкой COVID-19, панголином. Curr. Биол. 30 , 1346–1351.e2 (2020).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 26.

    Luan, J., Lu, Y., Jin, X. & Zhang, L. Распознавание белка ACE2 млекопитающих предсказывает диапазон хозяев и оптимизированный ACE2 для инфекции SARS-CoV-2. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 526 , 165–169 (2020).

  • 27.

    Tilocca, B. et al. Молекулярные основы взаимоотношений COVID-19 у разных видов: единая точка зрения на здоровье. Microbes Infect. 22 , 218–220 (2020).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 28.

    Kames, J. et al. TissueCoCoPUT: Новые таблицы использования кодонов и пар кодонов, специфичных для тканей человека, основанные на дифференциальной экспрессии генов в тканях. J. Mol. Биол. 432 , 3369–3378 (2020).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 29.

    Lv, L., Li, G., Chen, J., Liang X. & Li, Y. Сравнительный геномный анализ выявил специфический характер мутаций между человеческим коронавирусом SARS-CoV-2 и Bat-SARSr-CoV RaTG13. Препринт на https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.02.27.969006v1 (2020).

  • 30.

    Hadfield, J. et al. Nextstrain: Отслеживание эволюции патогенов в реальном времени. Биоинформатика 34 , 4121–4123 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 31.

    Zhou, T., Gu, W., Ma, J., Sun, X. & Lu, Z. Анализ использования синонимичных кодонов в вирусе H5N1 и других вирусах гриппа А. Biosystems 81 , 77–86 (2005).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 32.

    van Hemert, F., van de Kuyl, A.C. & Berkhout, B. Влияние смещенного нуклеотидного состава геномов вирусной РНК на структуру РНК и использование кодонов. J. Gen. Virol. 97 , 2608–2619 (2016).

    PubMed
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 33.

    Нами, О., Моран, С. Дж., Стюарт, Д. И., Гилберт, Р. Дж. И Брайерли, И. Механическое объяснение функции псевдоузла РНК в запрограммированном рибосомном сдвиге рамки. Nature 441 , 244–247 (2006).

    ADS
    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 34.

    Баранов П.В. и др. Запрограммированный сдвиг рамки считывания рибосом при декодировании генома SARS-CoV. Вирусология 332 , 498–510 (2005).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 35.

    Zadeh, J. N. et al. NUPACK: Анализ и дизайн систем нуклеиновых кислот. J. Comput. Chem. 32 , 170–173 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 36.

    Кимчи, О., Крагнолини, Т., Бреннер, М. П., Колвелл, Л. Дж. Основа физики полимеров для энтропии произвольных псевдоузлов. Biophys. J. 117 , 520–532 (2019).

    ADS
    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 37.

    Диркс, Р. М. и Пирс, Н. А. Алгоритм для вычисления вероятностей образования пар нуклеиновых кислот, включая псевдоузлы. J. Comput. Chem. 25 , 1295–1304 (2004).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 38.

    Шарп П. М. и Ли У.H. Эволюционный взгляд на использование синонимичных кодонов в одноклеточных организмах. J. Mol. Evol. 24 , 28–38 (1986).

    ADS
    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 39.

    Kaplan, B. S. et al. Вакцинация свиней деоптимизированной живой аттенуированной вакциной против гриппа с использованием смещения пар кодонов защищает от гомологичного заражения. Вакцина 36 , 1101–1107 (2018).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 40.

    Mueller, S. et al. Живые аттенуированные вакцины против вируса гриппа, разработанные с помощью рационального компьютерного дизайна. Нат. Biotechnol. 28 , 723–726 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 41.

    Мюллер, С., Папамихаил, Д., Коулман, Дж. Р., Skiena, S. & Wimmer, E. Снижение скорости синтеза полиовирусного белка за счет крупномасштабной деоптимизации кодонов вызывает ослабление вирулентности вируса за счет снижения специфической инфекционности. J. Virol. 80 , 9687–9696 (2006).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 42.

    Манокаран, Г., Макферсон, К. Г. и Симмонс, К. П. Аттенуация репликона вируса денге путем деоптимизации кодонов неструктурных генов. Вакцина 37 , 2857–2863 (2019).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 43.

    Cai, Y. et al. Живая аттенуированная вакцина против лихорадки ласса, основанная на деоптимизации кодонов гена вирусного гликопротеина. mBio 11 , e00039–20. https://doi.org/10.1128/mBio.00039-20 (2020).

    Артикул
    PubMed
    PubMed Central

    Google ученый

  • 44.

    Tsai, Y.H. et al. Энтеровирус A71, содержащий кодон-деоптимизированный VP1 и высококачественную полимеразу, в качестве кандидата на вакцину следующего поколения. J. Virol. 93 , e02308–18. https://doi.org/10.1128/JVI.02308-18 (2019).

    CAS
    Статья
    PubMed
    PubMed Central

    Google ученый

  • 45.

    Ле Ноуэн, К., Коллинз, П. Л. и Буххольц, У. Дж. Аттенуация респираторных вирусов человека путем перекодирования синонимичного генома. Фронт. Иммунол. 10 , 1250 (2019).

    PubMed
    PubMed Central
    Статья
    CAS

    Google ученый

  • 46.

    Groenke, N. et al. Механизм ослабления вируса деоптимизацией пар кодонов. Cell Rep. 31 , 107586 (2020).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 47.

    Уолш И.М., Боуман, М. А., Сото Сантарриага, И. Ф., Родригес, А. и Кларк, П. Л. Синонимичные замены кодонов нарушают котрансляционную укладку белков in vivo и ухудшают приспособленность клеток. Proc. Natl. Акад. Sci. США 117 , 3528–3534 (2020).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 48.

    Виммер, Э., Мюллер, С., Тампи, Т. М. и Таубенбергер, Дж. К. Синтетические вирусы: новая возможность понять и предотвратить вирусные заболевания. Нат. Biotechnol. 27 , 1163–1172 (2009).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google ученый

  • 49.

    O’Leary, N.A. et al. База данных эталонных последовательностей (RefSeq) в NCBI: текущий статус, таксономическое расширение и функциональная аннотация. Nucleic Acids Res. 44 , D733-745 (2016).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 50.

    Hatcher, E. L. et al. Virus Variation Resource — Улучшенный ответ на возникающие вирусные вспышки. Nucleic Acids Res. 45 , D482 – D490 (2017).

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google ученый

  • 51.

    LingPy. Библиотека Python для исторической лингвистики v. 2.6.5 (2019).

  • Дизайн и кристаллическая структура нативного тримерной оболочки ВИЧ-1, который взаимодействует с множественными предшественниками широко нейтрализующих антител in vivo | Журнал экспериментальной медицины

    Мы благодарим Ларри Ляо, Бартона Хейнса, Уильяма Шифа, Джона Маскола, Памелу Бьоркман и Питера Квонга за предоставление антител.Благодарим Джудит Бургер и Майкла Голабека за техническую помощь. Мы благодарим Амстердамские когортные исследования по ВИЧ / СПИДу (ACS) за предоставление 27 клинических изолятов ВИЧ-1.

    ACS — результат сотрудничества между Службой здравоохранения Амстердама, Академическим медицинским центром Амстердамского университета, Фондом кровоснабжения Санквин и клиникой Яна ван Гойена; является частью Нидерландского фонда мониторинга ВИЧ; и при финансовой поддержке Центра по контролю за инфекционными заболеваниями Национального института общественного здравоохранения и окружающей среды Нидерландов.Часть исследований проводилась в GM / CA @ APS, которая полностью или частично финансировалась из федеральных фондов Национального института рака (ACB-12002) и Национального института общих медицинских наук (AGM-12006). В этом исследовании использовались ресурсы Advanced Photon Source, исследовательского центра Министерства энергетики США, который управляется Аргоннской национальной лабораторией для Министерства энергетики США по контракту № DE-AC02-06Ch21357. М. Медина-Рамирес является стипендиатом Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología Мексики.R.W. Sanders — получатель гранта Vidi от Нидерландской организации научных исследований (грант 917.11.314) и гранта для начинающих исследователей от Европейского исследовательского совета (ERC-StG-2011-280829-SHEV). Эта работа также была поддержана грантом Aids Fonds, Нидерланды 20160192 (RW Sanders и M. Medina-Ramírez), грантом P01 AI110657 Национальных институтов здравоохранения (JP Moore, AB Ward, IA Wilson и RW Sanders), International AIDS Vaccine Initiative через Консорциум нейтрализующих антител (грант SFP1849 M.Криспин, А. Уорд, И.А. Wilson), Центр иммунологии вакцины против ВИЧ / СПИДа и открытия иммуногенов (грант UM1 AI100663 MC Nussenzweig, RW Sanders, M. Crispin, AB Ward и IA Wilson), грант Национальных институтов здравоохранения R01 AI073148 (D. Nemazee) , Collaboration for AIDS Vaccine Discovery предоставляет гранты OPP1111923 и OPP1132237 (JP Moore и RW Sanders), а также грант Фонда Билла и Мелинды Гейтс (OPP1115782 AB Ward). Этот проект получил финансирование от исследовательской и инновационной программы Европейского Союза Horizon 2020 в рамках грантового соглашения 681137 (M.Криспин и Р.В. Сандерс).

    M. Medina-Ramírez и R.W. Sanders указаны в заявке на патент, касающейся тримеров Env, нацеленных на зародышевую линию. Авторы заявляют об отсутствии дополнительных конкурирующих финансовых интересов.

    Вклад авторов: Дизайн проекта: М. Медина-Рамирес, Ф. Гарсес, А. Эсколано, И. Дель Мораль-Санчес, Д. Немази, М.С. Нуссенцвейг, Дж.П. Мур, И.А.Уилсон и Р.В. Сандерс; Определение структуры рентгеновских лучей, компьютерное моделирование и интерпретация Ф. Гарсеса, М. Медина-Рамиреса, К. Слипена, Р. В. Сандерса, Р. Л. Стэнфилда и И.А. Уилсон; конструирование, характеристика и анализ мышей с «нокаутом», выполненные А. Эсколано, М. Медина-Рамирес, Т. Блейном и П. Скогом; поколение нокаутирующих мышей Н. Фройнд, П. Дозенович, А.Д. Гитлин и П. Ског; электронная микроскопия Г. Озоровского и А. Сторожить; Мутагенез белков Env, проведенный М. Медина-Рамирес, И. Дель Мораль-Санчес и Ф.Garces; ДСК эксперименты М.Дж. ван Бримена; анализы нейтрализации вирусов, проведенные M. Medina-Ramírez и T.L.G.M. ван ден Керкхоф; экспрессия, анализ и очистка белков — М. Медина-Рамирес, А. Купо, М. Голабек, П. ван дер Вуд, Ф. Гарсес и Ю. Хуа; Данные SPR, созданные и смоделированные A. Yasmeen и P.J. Klasse; анализ гликанового профиля A.-J. Беренс, Л. Причард и М. Криспин; анализы активации В-клеток in vitro, проведенные A.

    Оставьте комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *